本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品，具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，操作時(shí)間需45min，能減少操作誤差和工作強(qiáng)度。
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20~25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。若試劑中有晶體析出，回溫溶解后方可使用。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入錫箔袋，保存于2~8℃。
3、洗滌液【配液1】在使用前也需回溫。
4、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μL/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中，然后加入四環(huán)素類酶標(biāo)物50μL/孔，再加入四環(huán)素類抗試劑50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液【配液1】250μL/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huán)境反應(yīng)15min。
8、測(cè)定：加入終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。（若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定）。
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